Elektroforesis apa itu, apakah itu dan bagaimana ia dibuat

Elektroforesis adalah teknik makmal yang dilakukan dengan tujuan memisahkan molekul mengikut saiz dan muatan elektriknya supaya diagnosis penyakit dapat dibuat, ungkapan protein dapat diverifikasi atau mikroorganisme dapat dikenal pasti.

Elektroforesis adalah prosedur sederhana dan kos rendah, digunakan dalam rutin makmal dan dalam projek-projek penyelidikan. Menurut tujuan elektroforesis, mungkin diperlukan untuk menjalankan ujian dan peperiksaan lain untuk mencapai diagnosis, contohnya.

Apa untuknya

Elektroforesis boleh dilakukan untuk beberapa tujuan, sama ada dalam projek penyelidikan dan dalam diagnosis, kerana ia adalah teknik mudah dan kos rendah. Oleh itu, elektroforesis boleh dilakukan untuk:

Mengenal pasti virus, kulat, bakteria dan parasit, dengan aplikasi ini menjadi lebih biasa dalam projek penyelidikan;
Ujian bapa;
Semak ungkapan protein;
Kenal pasti mutasi, yang berguna dalam diagnosis leukemia, sebagai contoh;
Menganalisis jenis hemoglobin beredar, berguna dalam diagnosis anemia sel sabit;
Menilai jumlah protein yang ada di dalam darah.

Menurut tujuan elektroforesis, mungkin perlu melakukan ujian pelengkap yang lain untuk doktor untuk menyelesaikan diagnosis.

Bagaimana ia dilakukan?

Untuk melakukan elektroforesis, gel yang diperlukan, yang boleh terdiri daripada polyacrylamide atau agarose bergantung kepada matlamat, penampan elektroforesis dan tong, penanda berat molekul dan pewarna neon, sebagai tambahan kepada peralatan cahaya UV atau LED, juga dikenali sebagai transilluminator.

Selepas menyiapkan gel, objek tertentu mesti diletakkan supaya telaga dibuat di dalam gel, yang dikenali sebagai sikat, dan biarkan gel diselesaikan. Apabila gel sudah siap, gunakan bahan ke telaga. Untuk ini, penanda berat molekul perlu diletakkan di salah satu telaga, kawalan positif, iaitu bahan yang diketahui apa itu, kawalan negatif, yang menjamin kesahihan tindak balas, dan sampel yang akan dianalisis. Semua sampel mesti dicampur dengan pewarna neon, dengan cara ini adalah mungkin untuk menggambarkan band-band pada transilluminator.

Gel dengan sampel mestilah diletakkan di dalam tong elektroforesis, yang mengandungi penyelesaian buffer spesifik, dan kemudian peranti dihidupkan supaya arus elektrik dan, akibatnya, perbezaan potensial, yang penting untuk pemisahan zarah mengikut beban dan saiznya. Masa berjalan elektroporetik berbeza-beza mengikut objektif prosedur, dan boleh bertahan sehingga 1 jam.

Selepas masa yang ditetapkan, adalah mungkin untuk melihat hasil run elektroforetik melalui transilluminator. Apabila gel diletakkan di bawah sinaran UV atau LED, ada kemungkinan untuk menggambarkan corak banding: semakin besar molekul, semakin kecil penghijrahannya, semakin dekat dengan telaga, sementara molekul yang lebih ringan, semakin besar potensi migrasi.

Untuk reaksi yang akan disahkan, adalah perlu bahawa kumpulan kawalan positif divisualisasikan dan bahawa dalam kawalan negatif tiada apa yang divisualisasikan, kerana jika tidak ia adalah petunjuk bahawa terdapat pencemaran, dan keseluruhan proses mesti diulang.

Jenis elektroforesis

Elektroforesis boleh dilakukan untuk tujuan yang berlainan dan, menurut tujuannya, beberapa jenis gel boleh digunakan, yang paling biasa ialah polyacrylamide dan agarose.

Elektroforesis untuk mengenal pasti mikroorganisma adalah lebih biasa dilakukan di makmal penyelidikan, bagaimanapun, untuk tujuan diagnostik, elektroforesis dapat digunakan untuk mengenal pasti penyakit hematologi dan penyakit yang berevolusi dengan peningkatan jumlah protein, yang merupakan jenis utama elektroforesis :

1. Elektroforesis hemoglobin

Elektroforesis hemoglobin adalah teknik makmal yang dilakukan untuk mengenal pasti pelbagai jenis hemoglobin yang beredar dalam darah, yang memungkinkan untuk mengenal pasti adanya penyakit yang berkaitan dengan sintesis hemoglobin. Jenis hemoglobin dikenal pasti dengan cara elektroforesis pada pH tertentu, idealnya antara 8.0 dan 9.0, dengan corak band yang disahkan yang boleh dibandingkan dengan corak biasa, yang membolehkan pengenalpastian kehadiran hemoglobin yang tidak normal.

Apa yang dibuat untuk: Elektroforesis hemoglobin dilakukan untuk menyiasat dan mendiagnosis penyakit yang berkaitan dengan sintesis hemoglobin, seperti anemia sel sabit dan penyakit hemoglobin C, selain berguna untuk membezakan talasemia. Ketahui cara mentafsirkan elektroforesis hemoglobin.

2. Elektroforesis protein

Elektroforesis protein adalah peperiksaan yang diminta oleh doktor untuk menilai jumlah protein yang beredar dalam darah dan, dengan itu, untuk mengenal pasti penyakit. Ujian ini dilakukan dari sampel darah, yang disentrifugasi untuk mendapatkan plasma, bahagian darah yang terdiri daripada bahan-bahan lain, protein.

Selepas elektroforesis, corak band dapat divisualisasikan dan kemudiannya, graf di mana jumlah setiap pecahan protein ditunjukkan, menjadi asas untuk diagnosis.

Apa yang dibuat untuk: Elektroforesis protein membolehkan doktor untuk menyiasat berlakunya pelbagai myeloma, dehidrasi, sirosis, keradangan, penyakit hati, pankreatitis, lupus dan hipertensi mengikut pola band dan graf yang dibentangkan dalam laporan peperiksaan.

Memahami bagaimana ia dilakukan dan bagaimana untuk memahami hasil elektroforesis protein.